熒光濾光片的典型特征是截止深度深，自發熒光小，而且要求透射面形好，利于熒光成像的提取。所以較好的熒光濾光片采用單片無色透明的玻璃作為基底，在玻璃的兩個表面鍍膜。相比常規的用多片膠合或顏色玻璃輔助截止的熒光濾光片，單片式在熒光成像上有明顯優勢，但由于單片式的熒光濾光片的制作難度很高，所以成本較高。
 

　　熒光濾光片組由以下部件組成：
 

　　·激發濾光片，限制激發光的波長范圍；
 

　　·二向色鏡分色片，將激發光反射到樣品，并將較長波長的發射光傳輸到探測器；
 

　　·發射濾光片，將發射熒光的有限波長范圍傳遞到探測器。

 

　　在熒光濾光片組中，激發通帶位于熒光團的激發光譜之上，而發射通帶位于熒光團的發射光譜之上。設置兩個通帶以獲得更佳結果的能力取決于斯托克斯位移，即熒光團的峰值激發波長和峰值發射波長之間的納米間隔。許多流行的熒光探針具有較小的斯托克斯位移，小于其波長的3%。盡管這些探針的激發和發射通帶通常會放在一起，相反，短斯托克斯-位移熒光團的更典型的模式，長波長激發通帶邊緣和短波長發射通帶邊緣之間的所謂間隙相對于熒光團的交叉點非常不對稱，在該交叉點，歸一化的激發和發射曲線交叉。
 

　　這種不對稱性將發射濾光片通帶向外推到更長的波長，結果是發射濾光片捕獲的發射光更少，濾光片組性能降低。由于兩個原因，間隙很難減小：(1)減小的間隙導致較高水平的激發光通過，即從樣品平面反射到發射濾光片中的激發光；(2)制造可變性限制了我們將兩個光譜邊緣放置在狹窄間隙中的能力，而不會冒著兩個濾光片邊緣在較深OD處發生交叉的風險。